微透析采樣系統(tǒng)(Microdialysis)是一種從生物活體內(nèi)進(jìn)行動態(tài)微量生化取樣的技術(shù),具有活體連續(xù)取樣、動態(tài)觀察、定量分析、采樣量小、組織損傷輕等特點(diǎn)。
自動采血儀能增加研究藥物代謝和藥代動力研究團(tuán)隊的生產(chǎn)力。也能改善血液樣本收集的精確性和再現(xiàn)性,減少人員暴露于過敏原和降低人員抽血時對動物造成的緊張感。
尼康Ti2-LAPP系統(tǒng)提供模塊化照明器,用于全內(nèi)反射熒光(TIRF)、光活化/轉(zhuǎn)換、光漂白、落射熒光以及超分辨率顯微鏡(N-STORM)。每個模塊都可以靈活組合,構(gòu)建針對個人研究需求而優(yōu)化的顯微鏡系統(tǒng)。例如,可以將多個TIRF模塊合并到單個顯微鏡中,用于各向異性實(shí)驗(yàn)和快速、多角度TIRF成像。結(jié)合 TI2的 層結(jié)構(gòu),最多可將五個照明模塊合并到一個顯微鏡中(例如:兩個TIRF、一個FRAP、一個DMD和一個Epi-FL模塊都可以集成到一個Ti2上)。
TIRF觀察時,不同的樣品和觀察條件,往往需要不同的入射角度以及激光焦點(diǎn)。要想實(shí)現(xiàn)更好的TIRF入射角度和焦點(diǎn)調(diào)節(jié),需要操作者具備相應(yīng)的技能和經(jīng)驗(yàn)。H-TIRF模塊通過監(jiān)視反射光束自動調(diào)整激光的焦距和入射角,以進(jìn)行TIRF觀察。這種自動激光焦距調(diào)節(jié)和入射角調(diào)節(jié)是通過NIS-Elements軟件中的自動準(zhǔn)直功能進(jìn)行的。用戶可以保存和再現(xiàn)瞬逝場的入射角和穿透深度以用于后續(xù)實(shí)驗(yàn),以確保一致的成像結(jié)果。
通過NIS-Elements軟件,可以對激光入射角以及瞬逝場的穿透深度進(jìn)行調(diào)節(jié)。當(dāng)使用多個TRIF照明模塊時(如圖),不同波長的穿透深度可以獨(dú)立調(diào)節(jié)。
手動TIRF模塊包括漸變ND濾鏡(類似于H-TIRF模塊),可在整個視野范圍內(nèi)實(shí)現(xiàn)均勻的TIRF照明。使用高靈敏度相機(jī),人們可以使用這種TIRF照明器對細(xì)胞膜內(nèi)和細(xì)胞膜附近的蛋白質(zhì)的單分子和動態(tài)進(jìn)行成像。
從全自動到合理且電動化的運(yùn)轉(zhuǎn),這些模塊使用Ti2 LAPP系統(tǒng)使N-STORM超分辨率成像得以實(shí)現(xiàn)。其均配備了照明視野放大(1x、2x、4x)以及電動對準(zhǔn)功能。使這些系統(tǒng)可提供近乎20nm超高的圖像分辨率,達(dá)到傳統(tǒng)光學(xué)顯微鏡分辨率的10倍或更高。
DMD模塊可以對用戶指定的圖案和位置進(jìn)行光活化和光轉(zhuǎn)換,而傳統(tǒng)的FRAP單元只能對單個手動定位的點(diǎn)進(jìn)行光活化。DMD照明的形狀、大小、位置和數(shù)量可以使用NIS-Elements軟件自由定制。該功能支持研究人員在單個細(xì)胞或多個細(xì)胞內(nèi)光學(xué)標(biāo)記細(xì)胞或蛋白質(zhì)群的子集以跟蹤其行為。DMD模塊也非常適用于光遺傳學(xué)實(shí)驗(yàn),其中高度定制的ROI可用于光學(xué)誘導(dǎo)細(xì)胞或蛋白質(zhì)群體的功能變化。DMD模塊可以使用激光光源,也可以使用光毒性更小的LED光源。
使用此FRAP模塊,配合高幀率、高靈敏度的相機(jī),用戶可以進(jìn)行光漂白和光活化/轉(zhuǎn)換實(shí)驗(yàn)。該模塊可以照明細(xì)胞中的目標(biāo)點(diǎn),為研究細(xì)胞內(nèi)蛋白質(zhì)動力學(xué)提供了一種經(jīng)濟(jì)有效的方法,而無需使用點(diǎn)掃描共聚焦顯微鏡。
XY檢流計掃描模塊是一個光刺激模塊,通過點(diǎn)掃描的方式對樣品特定區(qū)域進(jìn)行刺激。將該模塊和AX/AX R共聚焦系統(tǒng)共同搭建在Ti2-E倒置顯微鏡上,則可以在光刺激的同時用共聚焦對樣品進(jìn)行活細(xì)胞動態(tài)成像。還可以搭載于AX R MP多光子共聚焦顯微鏡上。
大視野的EPI FL模塊是Ti2-LAPP系統(tǒng)的基本落射熒光照明器,專為使用Ti2倒置顯微鏡的大視野成像應(yīng)用而設(shè)計。它在落射熒光觀察時提供了無與倫比的25mm大視野,并具有緊湊的設(shè)計。它配備了石英復(fù)眼透鏡,可確保在整個視野范圍內(nèi)均勻的亮度,并在包括紫外線在內(nèi)的廣譜范圍內(nèi)提供高透射率。
Ti2-LAPP系統(tǒng)的模塊化和靈活的配置功能可為個人研究需求提供定制化的成像解決方案??梢苑奖愕靥鎿Q或添加各種模塊,以適應(yīng)不斷變化的實(shí)驗(yàn)需求,這是實(shí)驗(yàn)室不斷發(fā)展的研究方向和多用戶核心儀器的重要特征。例如,通過在單TIRF配置中添加第二個TIRF模塊,用戶可以輕松地進(jìn)行各向異性實(shí)驗(yàn)和快速、多角度TIRF實(shí)驗(yàn)。添加光活化/轉(zhuǎn)換模塊(如DMD或FRAP模塊)可以跟蹤蛋白質(zhì)亞群,從而深入了解蛋白質(zhì)行為,避免對整體進(jìn)行成像時產(chǎn)生誤判。
利用尼康 TI2的 雙層結(jié)構(gòu),不同模塊可以配置到兩個單獨(dú)的層,而每層可以配置多個模塊。使用雙層配置可為每個照明模塊實(shí)現(xiàn)極好濾光片配置。例如,把H-TIRF模塊放置在下層并且將DMD模塊放置在上層,用戶可以在它們各自的濾光片轉(zhuǎn)盤中同時使用專用于TIRF成像和光活化的單獨(dú)的濾光塊。這種配置可實(shí)現(xiàn)濾光片選擇,提高實(shí)驗(yàn)精度,同時保持高的采集速度。
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